美國紅楓種胚愈傷組織誘導!增殖培養(yǎng)技術(shù)研究初報
發(fā)布者：王振龍、張雷 發(fā)布日期：2008-08-25 點擊次數(shù)：1492243
美國紅楓種胚愈傷組織誘導、增殖培養(yǎng)技術(shù)研究初報
王振龍 張雷 翟玉敏 代勇
遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學院 遼寧營口 撫順農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心 遼寧撫順
!!隨著我國城市環(huán)境建設(shè)由單純的綠化逐漸向綠
化’美化’彩化方向發(fā)展!很多企業(yè)從國外大量引
種彩葉樹!但存在引種成本高’一些品種發(fā)芽率
低’種子繁殖易發(fā)生變異’常規(guī)繁殖周期長和繁殖
系數(shù)低’苗木量短期難以滿足市場需求的問題%針
對上述問題!我們以美國紅楓種胚為接種材料!進
行種胚愈傷組織誘導’增殖培養(yǎng)的研究!為進一步
開展包括美國紅楓在內(nèi)的彩葉樹組培快繁提供理論
依據(jù)%
!!材料和方法
!"!!材料
美國紅楓種子!市售%
!"#!方法
&8#8&!種子處理與接種
美國紅楓種子水浸#"A后!在超凈臺上于
!$C的酒精液中浸泡>$L!然后放入$8&C升汞液
中浸泡&$B0+!最后用無菌水沖洗"次!以無菌濾
紙吸干種子表面水分!剝?nèi)シN皮!將種胚分別接種
于誘導培養(yǎng)基上!每瓶接種胚&個%
&8#8#!誘導培養(yǎng)
愈傷組織誘導培養(yǎng)基見表&%培養(yǎng)基分別附加
$8=C 瓊脂和&8%C 的葡萄糖!培養(yǎng)室溫度為
#%^!光照為&%$$!#$$$-Y%#周后調(diào)查愈傷組
織誘導情況%
&8#8>!增殖培養(yǎng)
將愈傷組織切成$8%3B#小塊!轉(zhuǎn)接至增殖培
養(yǎng)基!每瓶接&塊愈傷組織%兩次增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)
基分別見表#’表>%培養(yǎng)基分別附加$8=C瓊脂
和&8%C的葡萄糖!培養(yǎng)室溫度為#%^!光照為
&%$$!#$$$-Y%分別于#%M和&%M調(diào)查兩次增殖
培養(yǎng)時不同培養(yǎng)基對愈傷組織增殖的影響%
#!結(jié)果與分析
#"!!不同培養(yǎng)基對愈傷組織誘導的影響
表!!不同培養(yǎng)基誘導愈傷組織的情況
編號培養(yǎng)基
調(diào)查瓶數(shù)
#瓶$
誘導率
#C$
備注
& &(#NE]_2$8% & &$$
# NE]O2#]F22$8% & $ 種胚死亡
> &(#NE]O2&]F22$8% & $ 形成幼苗
" &(#NE]O2#]F22$8% & &$$
種胚接種&周后!#號和>號種胚子葉有發(fā)褐
跡象!無愈傷組織產(chǎn)生!>號種胚膨大&&號和"
號培養(yǎng)基誘導效果較好!"號中種胚的子葉表面逐
漸膨大!向上卷起!邊緣有粉紅色突起%#周后!
"號愈傷組織變大!由粉紅色轉(zhuǎn)為黃綠色且向中間
擴展!并逐漸長大!約#3B# 左右!質(zhì)地較致密!
而&號雖出現(xiàn)愈傷組織!但后期質(zhì)地較硬!突起
少!棕紅色&>號種胚發(fā)育成無菌幼苗&#號種胚
變褐死掉%相對而言!"號培養(yǎng)基比較適合誘導愈
傷組織#見表&$%另外!從#號與"號的培養(yǎng)基
成分來看!由于選用NE基本培養(yǎng)基的劑量不同!
培養(yǎng)效果則呈現(xiàn)明顯差異!說明培養(yǎng)基中無機鹽含
量低有利于愈傷組織誘導%這與胞外環(huán)境滲透壓大
小影響細胞分裂有關(guān)%
#"#!不同培養(yǎng)基對愈傷組織增殖的影響
初代誘導出的愈傷組織在培養(yǎng)一個月后!轉(zhuǎn)接
到增殖培養(yǎng)基!其結(jié)果見表#%綜合比較誘導率與
增殖系數(shù)二項指標!%號增殖效果好于&號和D
號!而且從跟蹤調(diào)查結(jié)果來看!%號愈傷組織短時
間內(nèi)誘導’增殖快!質(zhì)地致密疏松程度!利于下一
步的芽分化%這說明%號培養(yǎng)基附加的O2和較高
濃度的922!以及二者的添加比例更適合美國紅
楓愈傷組織的誘導和增殖%另外!培養(yǎng)基中附加
_2的作用效果不明顯是否與濃度低有關(guān)!需進一
步試驗驗證%
從第二次增殖培養(yǎng)結(jié)果#見表>$可以看出!
仍然是%號培養(yǎng)基愈傷組織誘導率高%轉(zhuǎn)接半個月
后!%號培養(yǎng)基中的愈傷組織就形成粉紅色突起!
隨著培養(yǎng)時間延長!粉紅色突起逐漸變成紫紅色和
淺綠色!并不斷擴大!最大的約有$8%3B#左右!!和=號中的愈傷組織誘導情況較差!有%$C以上
的愈傷組織生長慢"停止生長或死亡!所形成的愈
傷組織也較%號中的小得多#從培養(yǎng)基成分分析得知!愈傷組織誘導"增殖培養(yǎng)基必須同時添加一定
量的細胞分裂素和細胞生長素!而且不必添加
_2#!!另外!將%號增殖培養(yǎng)#個月"已老化的愈傷
組織再次轉(zhuǎn)接到%號新鮮培養(yǎng)基上!半個月后的愈
傷組織生產(chǎn)情況見表"#從愈傷組織的生長現(xiàn)象可
以看出!第三次增殖的愈傷組織從原來的細胞分裂
局限在組織外緣轉(zhuǎn)向了愈傷組織內(nèi)部深處的局部地
區(qū)!細胞的分裂出現(xiàn)了瘤狀結(jié)構(gòu)外表和內(nèi)部分化#
表-!.號增殖培養(yǎng)基內(nèi)的愈傷組織生長情況
愈傷組織數(shù)
$瓶%
生長情況愈傷組織體積$3B>%
#% 好&8%
&% 良好$8!
! 稍差$8%
$!結(jié)論
美國紅楓種胚愈傷組織最適誘導培養(yǎng)基為&&
#NE]D;O2#]F22$8%(最適增殖培養(yǎng)基為&&
#NE]D;O2#]922$8%#誘導和增殖培養(yǎng)基均
添加&8%C葡萄糖"$8=C瓊脂(從培養(yǎng)基成分來
看!無機鹽含量低有利于愈傷組織的誘導#對美國
紅楓離體芽分化和生根試驗有待于進一步研究#
參考文獻!
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)#*傅家瑞8 種子生理)N*8 北京’科學出版社!
&<<=8&D=;&="8
)>*熊!麗!吳麗芳8 觀賞花卉的組織培養(yǎng)與大規(guī)模生產(chǎn)
)N*8北京’化學工業(yè)出版社#$$>8
表#!不同培養(yǎng)基對美國紅楓種胚愈傷組織增殖的影響!
編號培養(yǎng)基接種數(shù)$瓶% 愈傷組織數(shù)$瓶% 誘導率$C% 增殖系數(shù)
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!!注’#%M后調(diào)查結(jié)果
--來源：【遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學院學報】